Un mundo una pelea
─Cooperación internacional para construir una comunidad global de destino común que responda al desafío de la pandemia de COVID-19
El nuevo coronavirus que se extiende por todo el mundo ha resultado en una crisis pandémica mundial en curso por el COVID-19.El nuevo coronavirus no tiene fronteras, ningún país se librará de esta batalla contra el COVID-19.En respuesta a esta pandemia mundial de COVID-19, Liming Bio-Products Corp está haciendo contribuciones para apoyar el bienestar de nuestras comunidades globales.
Nuestro mundo se enfrenta actualmente al impacto sin precedentes de la nueva pandemia de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19).Hasta la fecha, no existe un fármaco eficaz disponible para el tratamiento de esta enfermedad.Sin embargo, se han desarrollado muchas pruebas de diagnóstico para la detección de COVID-19.Estas pruebas se basan en métodos moleculares o serológicos para detectar los nuevos biomarcadores de anticuerpos o ácidos nucleicos específicos del coronavirus.Dado que el COVID-19 ha alcanzado el estado de pandemia, el diagnóstico temprano de la nueva infección por coronavirus es fundamental para evaluar la propagación del virus y contenerlo, pero aún no existe una prueba perfecta para uso universal.Tenemos que saber qué pruebas podrían usarse potencialmente para la detección, el diagnóstico y el seguimiento de la infección por COVID-19, y cuáles son sus limitaciones.Es muy importante cómo hacer un mejor uso de estas herramientas científicas y ayudar a identificar y controlar la aparición de esta enfermedad grave y de rápida propagación.
El propósito de la detección del nuevo coronavirus es determinar si es un individuo que tiene infección por COVID-19 o un portador asintótico que puede propagar el virus de forma silenciosa, para brindar información esencial que oriente la toma de decisiones para el tratamiento clínico.Estudios previos han demostrado que el 70% de las decisiones clínicas dependen de los resultados de las pruebas.Cuando se utilizan diferentes métodos de detección, los requisitos de los kits de reactivos de detección también son diferentes.
Figura 1
Figura 1:Diagrama que muestra las etapas clave de los niveles generales de biomarcadores durante el transcurso típico de la infección por COVID-19.El eje X indica el número de días de infección y el eje Y indica la carga viral, la concentración de antígenos y la concentración de anticuerpos en diferentes períodos.Anticuerpo se refiere a anticuerpos IgM e IgG.Tanto la RT-PCR como la detección de antígenos se utilizan para detectar la presencia o ausencia de un nuevo coronavirus, que es una prueba directa para la detección temprana de pacientes.Dentro de una semana de la infección viral, se prefiere la detección por PCR o la detección de antígenos.Después de la infección por el nuevo coronavirus durante aproximadamente 7 días, el anticuerpo IgM contra el nuevo coronavirus ha aumentado gradualmente en la sangre del paciente, pero la duración de la existencia es corta y su concentración disminuye rápidamente.Por el contrario, el anticuerpo IgG contra el virus aparece más tarde, generalmente alrededor de 14 días después de la infección por el virus.La concentración de IgG aumenta gradualmente y persiste un largo período en la sangre.Así, si se detecta la IgM en la sangre del paciente, significa que el virus se ha infectado recientemente, lo que es un marcador de infección precoz.Cuando se detecta el anticuerpo IgG en la sangre del paciente, significa que la infección viral ha sido durante algún tiempo.También se denomina infección tardía o infección previa.A menudo se ve en pacientes que están en la fase de recuperación.
Los biomarcadores del nuevo coronavirus
El nuevo coronavirus es un virus de ARN, que está compuesto de proteínas y ácidos nucleicos.El virus invade el cuerpo del huésped (humano), ingresa a las células a través del receptor ACE2 correspondiente al sitio de unión y se replica en las células huésped, lo que hace que el sistema inmunitario humano responda a los invasores extraños y produzca anticuerpos específicos.Por lo tanto, los ácidos nucleicos y los antígenos del vial, y los anticuerpos específicos contra el nuevo coronavirus pueden usarse teóricamente como biomarcadores específicos para la detección del nuevo coronavirus.Para la detección de ácidos nucleicos, la tecnología RT-PCR es la más utilizada, mientras que los métodos serológicos se utilizan comúnmente para la detección de los nuevos anticuerpos específicos del coronavirus.Actualmente, hay una variedad de métodos de prueba disponibles que podemos elegir para probar la infección por COVID-19 [1].
Principios básicos de los principales métodos de prueba para el nuevo coronavirus
Muchas pruebas de diagnóstico para COVID_19 están disponibles hasta el momento, y cada día se aprueban más kits de prueba bajo una autorización de uso de emergencia.Aunque los nuevos desarrollos de pruebas están saliendo con tantos nombres y formatos diferentes, todas las pruebas actuales de COVID_19 se basan básicamente en dos tecnologías principales: detección de ácido nucleico para el ARN viral e inmunoensayos serológicos que detectan anticuerpos virales específicos (IgM e IgG).
01. Detección de ácido nucleico
La reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR), la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) y la secuenciación de próxima generación (NGS) son los métodos de ácido nucleico comunes para la detección del nuevo ARN del coronavirus.RT-PCR es el primer tipo de prueba para COVID-19, recomendado tanto por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como por el Centro para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) de EE. UU.
02. Detección de anticuerpos serológicos
El anticuerpo es una proteína protectora producida en el cuerpo humano en respuesta a la infección por el virus.La IgM es un tipo temprano de anticuerpo mientras que la IgG es un anticuerpo de tipo posterior.La muestra de suero o plasma generalmente se examina para detectar la presencia de tipos específicos de IgM e IgG del anticuerpo para evaluar las fases aguda y convaleciente de la infección por COVID-19.Estos métodos de detección basados en anticuerpos incluyen ensayo de inmunocromatografía de oro coloidal, inmunocromatografía de látex o microesferas fluorescentes, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y ensayo de quimioluminiscencia.
03. Detección de antígenos virales
El antígeno es una estructura en el virus reconocida por el cuerpo humano que activa el sistema de defensa inmunitario para producir anticuerpos para eliminar el virus de la sangre y los tejidos.Un antígeno viral presente en el virus puede ser dirigido y detectado usando un inmunoensayo.Al igual que el ARN viral, los antígenos virales también están presentes en el tracto respiratorio de las personas infectadas y pueden usarse para diagnosticar la fase aguda de la infección por COVID-19.Por lo tanto, a menudo se recomienda recolectar muestras de las vías respiratorias superiores, como saliva, hisopos nasofaríngeos y orofaríngeos, esputo de tos profunda, líquido de lavado broncoalveolar (BALF) para la prueba inicial de antígenos.
Selección de métodos de prueba para el nuevo coronavirus
La selección de un método de prueba involucra muchos factores, incluido el entorno clínico, el control de calidad de las pruebas, el tiempo de respuesta, los costos de las pruebas, los métodos de recolección de muestras, los requisitos técnicos del personal de laboratorio, los requisitos de las instalaciones y los equipos.La detección de ácidos nucleicos o antígenos virales proporciona evidencia directa de la presencia de los virus y confirma el diagnóstico de una nueva infección por coronavirus.Aunque existen muchos métodos para la detección de antígenos, su sensibilidad de detección del nuevo coronavirus es teóricamente menor que la de la amplificación por RT-PCR.La prueba de anticuerpos es la detección de anticuerpos antivirus producidos en el cuerpo humano, que se retrasa en el tiempo y, a menudo, no se puede utilizar para la detección temprana durante la fase aguda de la infección por el virus.El entorno clínico para las aplicaciones de detección puede variar y los sitios de recolección de muestras también pueden ser diferentes.Para la detección de ácidos nucleicos virales y antígenos, la muestra debe recolectarse en el tracto respiratorio donde está presente el virus, como hisopos nasofaríngeos, hisopos orofaríngeos, esputo o líquido de lavado broncoalveolar (BALF).Para la detección basada en anticuerpos, es necesario recolectar una muestra de sangre y examinarla para detectar la presencia de anticuerpos antivirus específicos (IgM/IgG).Sin embargo, los resultados de las pruebas de anticuerpos y ácidos nucleicos pueden complementarse entre sí.Por ejemplo, cuando el resultado de la prueba es ácido nucleico negativo, IgM negativo pero IgG positivo, estos resultados indican que el paciente actualmente no porta el virus, pero se recuperó de la nueva infección por coronavirus.[2]
Ventajas y desventajas de las nuevas pruebas de coronavirus
En el Protocolo de diagnóstico y tratamiento para la neumonía por coronavirus novedoso (versión de prueba 7) (publicado por la Comisión Nacional de Salud y la Administración Estatal de Medicina Tradicional China el 3 de marzo de 2020), las pruebas de ácido nucleico se utilizan como el método estándar de oro para el diagnóstico de la neumonía por coronavirus nuevo. infección por coronavirus, mientras que la prueba de anticuerpos también se considera como uno de los métodos de confirmación para el diagnóstico.
Hallazgos patogénicos y serológicos
(1) Hallazgos patogénicos: el ácido nucleico del nuevo coronavirus se puede detectar en hisopos nasofaríngeos, esputo, secreciones del tracto respiratorio inferior, sangre, heces y otras muestras utilizando métodos RT-PCR y/o NGS.Es más preciso si las muestras se obtienen del tracto respiratorio inferior (extracción de esputo o vías aéreas).Las muestras deben enviarse para su análisis lo antes posible después de la recolección.
(2) Hallazgos serológicos: la IgM específica del virus NCP se vuelve detectable alrededor de 3 a 5 días después del inicio;IgG alcanza una titulación de al menos 4 veces más durante la convalecencia en comparación con la fase aguda.
Sin embargo, la selección de métodos de prueba depende de las ubicaciones geográficas, las reglamentaciones médicas y los entornos clínicos.En los EE. UU., los NIH emitieron Pautas para el tratamiento de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) (sitio actualizado: 21 de abril de 2020) y la FDA emitió una Política para pruebas de diagnóstico para la enfermedad por coronavirus-2019 durante la emergencia de salud pública (emitida el 16 de marzo de 2020). ), en el que las pruebas serológicas de los anticuerpos IgM/IgG seleccionados solo como prueba de detección.
Método de detección de ácido nucleico
RT_PCR es una prueba de ácido nucleico altamente sensible diseñada para detectar si el ARN del nuevo coronavirus está presente o no en la muestra respiratoria o de otro tipo.Un resultado positivo de la prueba de PCR significa la presencia de un nuevo ARN de coronavirus en la muestra para confirmar la infección por COVID-19.Un resultado negativo de la prueba de PCR no significa la ausencia de infección por el virus porque podría verse afectado por la mala calidad de la muestra o el momento de la enfermedad en la fase de recuperación, etc.Aunque la RT-PCR es una prueba muy sensible, tiene varios inconvenientes.Las pruebas de RT-PCR pueden requerir mucho trabajo y mucho tiempo, lo que depende de manera crucial de la alta calidad de la muestra.Esto puede ser un desafío porque la cantidad de ARN viral no solo varía enormemente entre diferentes pacientes, sino que también puede variar dentro del mismo paciente según los puntos de tiempo en que se recolecta la muestra, así como las fases de infección o el inicio de los síntomas clínicos.La detección del nuevo coronavirus requiere muestras de alta calidad que contengan una cantidad suficiente de ARN viral intacto.
La prueba RT-PCR puede dar un resultado negativo incorrecto (falso negativo) para algunos pacientes que tienen infección por COVID-19.Como sabemos, los principales sitios de infección del nuevo coronavirus se encuentran en el pulmón y el tracto respiratorio inferior, como los alvéolos y los bronquios.Por lo tanto, se considera que la muestra de esputo de una tos profunda o el líquido de lavado broncoalveolar (BALF) tienen la mayor sensibilidad para la detección viral.Sin embargo, en la práctica clínica, las muestras a menudo se obtienen del tracto respiratorio superior mediante hisopos nasofaríngeos u orofaríngeos.La recolección de estas muestras no solo es incómoda para los pacientes, sino que también requiere personal especialmente capacitado.Para que el muestreo sea menos invasivo o más fácil, en algunos casos se les puede dar a los pacientes un hisopo oral y permitirles tomar una muestra de la mucosa bucal o de la lengua tomándolos ellos mismos.Sin suficiente ARN viral, la RT-qPCR puede arrojar un resultado de prueba falso negativo.En la provincia de Hubei, China, la sensibilidad de la RT-PCR en la detección inicial se informó solo entre un 30 % y un 50 %, con un promedio del 40 %.La alta tasa de falsos negativos probablemente se debió a un muestreo insuficiente.
Además, la prueba RT-PCR requiere personal altamente capacitado para realizar pasos complejos de extracción de ARN y procedimientos de amplificación por PCR.También requiere un mayor nivel de protección de bioseguridad, instalaciones de laboratorio especiales e instrumentos de PCR en tiempo real.En China, la prueba de RT-PCR para la detección de COVID-19 debe realizarse en laboratorios de nivel de bioseguridad 2 (BSL-2), con protección del personal utilizando prácticas de nivel de bioseguridad 3 (BSL-3).Según estos requisitos, desde principios de enero hasta principios de febrero de 2020, la capacidad del laboratorio de los CDC de China Wuhan solo pudo detectar unos pocos cientos de casos por día.Normalmente, esto no sería un problema al probar otras enfermedades infecciosas.Sin embargo, cuando se trata de una pandemia global como la COVID-19, con millones de personas potencialmente para hacerse la prueba, la RT-PCR se convierte en un problema crítico debido a sus requisitos de instalaciones de laboratorio especiales o equipo técnico.Estas desventajas pueden limitar el uso de la RT-PCR como una herramienta eficaz para la detección y también pueden provocar retrasos en los informes de los resultados de las pruebas.
Método serológico de detección de anticuerpos
Con el progreso del curso de la enfermedad, especialmente en las etapas media y tardía, la tasa de detección de anticuerpos es muy alta.Un estudio en el Hospital Central Sur de Wuhan mostró que la tasa de detección de anticuerpos podría alcanzar más del 90% en la tercera semana de la infección por COVID-19.Además, el anticuerpo es el producto de la respuesta inmune humana contra el nuevo coronavirus.La prueba de anticuerpos ofrece varias ventajas sobre la RT-PCR.En primer lugar, las pruebas serológicas de anticuerpos son sencillas y rápidas.Las pruebas de flujo lateral de anticuerpos se pueden utilizar en el punto de atención para obtener un resultado en 15 minutos.En segundo lugar, el objetivo detectado por la prueba serológica es el anticuerpo, que se sabe que es mucho más estable que el ARN viral.Durante la recolección, el transporte, el almacenamiento y las pruebas, las muestras para pruebas de anticuerpos son generalmente más estables que las muestras para RT-PCR.En tercer lugar, debido a que el anticuerpo se distribuye uniformemente en la circulación sanguínea, hay menos variación de muestreo en comparación con la prueba de ácido nucleico.El volumen de muestra requerido para la prueba de anticuerpos es relativamente pequeño.Por ejemplo, 10 microlitros de sangre obtenida por punción digital son suficientes para usar en la prueba de flujo lateral de anticuerpos.
En general, la prueba de anticuerpos se elige como una herramienta complementaria para la detección de ácidos nucleicos para mejorar la tasa de detección del nuevo coronavirus durante el curso de la enfermedad.Cuando la prueba de anticuerpos se usa junto con una prueba de ácido nucleico, puede aumentar la precisión del ensayo para el diagnóstico de COVID19 al reducir los posibles resultados falsos positivos y falsos negativos.La guía de operación actual no recomienda usar dos tipos de prueba por separado como un formato de detección independiente, sino que debe usarse como un formato combinado.[2]
Figura 2:La interpretación correcta de los resultados de las pruebas de ácido nucleico y anticuerpos para la detección de la nueva infección por coronavirus
Figura 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Nuevo kit de prueba rápida dual de anticuerpos IgM/IgG para coronavirus (StrongStep®Prueba rápida de anticuerpos SARS-CoV-2 IgM/IgG, inmunocromatografía de látex)
Figura 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novel Coronavirus (SARS-CoV-2) Multiplex Real-Time PCR kit (detección de tres genes, método de sonda fluorescente).
Nota:Este kit de PCR de alta sensibilidad y listo para usar está disponible en formato liofilizado (proceso de secado por congelación) para almacenamiento a largo plazo.El kit se puede transportar y almacenar a temperatura ambiente y es estable durante un año.Cada tubo de premezcla contiene todos los reactivos necesarios para la amplificación por PCR, incluidos transcriptasa inversa, Taq polimerasa, cebadores, sondas y sustratos de dNTP. Los usuarios pueden simplemente reconstituir la mezcla agregando agua de grado PCR junto con la plantilla y luego cargar en un instrumento de PCR para ejecutar la amplificación.
En respuesta al nuevo brote de coronavirus, Liming Bio-Products Co., Ltd. ha trabajado rápidamente para desarrollar dos kits de diagnóstico que permitan a los laboratorios clínicos y de salud pública diagnosticar rápidamente la infección por COVID-19.Estos kits son muy adecuados para su uso en la detección a gran escala en países y regiones donde el nuevo brote de coronavirus se está propagando rápidamente y para proporcionar diagnóstico y confirmación de la infección por COVID-19.Estos kits son para usar solo bajo la Autorización de uso de emergencia notificada previamente (PEUA).Las pruebas están limitadas a laboratorios certificados bajo las regulaciones de las autoridades nacionales o locales.
Método de detección de antígenos
1. La detección de antígenos virales se clasifica en la misma categoría de detección directa que la detección de ácidos nucleicos.Estos métodos de detección directa buscan evidencia de patógenos virales en la muestra y pueden usarse para el diagnóstico de confirmación.Sin embargo, el desarrollo de kits de detección de antígenos requiere anticuerpos monoclonales de alta calidad con gran afinidad y alta sensibilidad capaces de reconocer y capturar virus patógenos.Por lo general, lleva más de seis meses seleccionar y optimizar un anticuerpo monoclonal adecuado para usar en la preparación del kit de detección de antígenos.
2. Actualmente, los reactivos para la detección directa del nuevo coronavirus aún se encuentran en etapa de investigación y desarrollo.Por lo tanto, ningún kit de detección de antígenos ha sido clínicamente validado y comercialmente disponible.Aunque se informó anteriormente que una empresa de diagnóstico en Shenzhen desarrolló un kit de detección de antígenos y lo probó clínicamente en España, la confiabilidad y precisión del ensayo no se pudieron validar debido a la presencia de problemas de calidad del reactivo.Hasta la fecha, la NMPA (antigua FDA de China) aún no ha aprobado ningún kit de detección de antígenos para uso clínico.En conclusión, se han desarrollado una variedad de métodos de detección.Cada método tiene sus ventajas y limitaciones.Los resultados de diferentes métodos se pueden utilizar para verificación y complemento.
3. Producir un kit de prueba COVID-19 de calidad depende en gran medida de la optimización durante la investigación y el desarrollo.Encalado Bio-Product Co., Ltd.Los kits de prueba deben cumplir con estrictos estándares de fabricación y control de calidad para garantizar que brinden los más altos niveles de rendimiento y consistencia.Los científicos de Liming Bio-Product Co., Ltd. tienen más de veinte años de experiencia en el diseño, prueba y optimización de kits de diagnóstico in vitro para garantizar el más alto nivel de rendimiento en la cuantificación analítica.
Durante la pandemia de COVID-19, el gobierno chino enfrentó un aumento de la enorme demanda de materiales de prevención de epidemias en los puntos críticos internacionales.El 5 de abril, en la conferencia de prensa del Mecanismo Conjunto de Prevención y Control del Consejo de Estado "Fortalecimiento de la gestión de calidad de los materiales médicos y regulación del orden del mercado", Jiang Fan, inspector de primer nivel del Departamento de Comercio Exterior del Ministerio de Comercio, dijo: "A continuación, centraremos nuestros esfuerzos en dos aspectos, primero, para acelerar el apoyo de más suministros médicos que necesita la comunidad internacional, y también, para mejorar el control de calidad, la regulación y la gestión de los productos". Haremos la contribución de China para responder de manera conjunta a la epidemia mundial y construir una comunidad de destino para la humanidad.
Figura 5:El nuevo reactivo de coronavirus de Liming Bio-Products Co.,Ltd. ha obtenido el certificado de registro CE de la UE
el certificado de honor
Houston
Figura 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. apoyó al Hospital de montaña Wuhan Vulcan (HouShenShan) para luchar contra la epidemia de COVID-19 y recibió el certificado honorario de la Cruz Roja de Wuhan.El hospital de montaña Wuhan Vulcan es el hospital más famoso de China que se especializa en el tratamiento de pacientes graves con COVID-19.
A medida que el nuevo brote de coronavirus continúa propagándose por todo el mundo, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. está dando un paso adelante para apoyar y ayudar a las comunidades de todo el mundo con nuestras tecnologías innovadoras para luchar contra esta amenaza global sin precedentes.La prueba rápida de la infección por COVID-19 es una parte fundamental para abordar esta amenaza.Continuamos contribuyendo de manera significativa al proporcionar plataformas de diagnóstico de alta calidad a los trabajadores de atención médica de primera línea para que las personas puedan recibir los resultados de las pruebas críticas que necesitan.Los esfuerzos de Liming Bio-products Co., Ltd. en la batalla contra la pandemia de COVID-19 son contribuir con nuestras tecnologías, experiencias y conocimientos a las comunidades internacionales para la construcción de una comunidad global de destino.
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Correo electrónico: sales@limingbio.com
Sitio web: https://limingbio.com
Hora de publicación: 01-may-2020
